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   确定DNA双股链上每一个独立结构单元或碱基的确切顺序的过程。测序经常被称为破译,因为其结果就像解码一样。解码结果包含数百页和成千上万种字母的序列,这些字母表示4种不同的碱基,它们是腺嘌呤,鸟嘌呤,胞嘧啶,和胸腺嘧啶,分别用它们的首字母A,T,C,G表示,其排列顺序中蕴藏着各种各样的遗传信息和生命指令。
测序方法:
   我们采用ABI377和ABI310测序仪及配套的BigDye Teminator试剂盒进行DNA的序列测定。BigDye Terminators是美国应用生物系统公司开发的用于该公司测序仪的专用双脱氧链终止法测序反应中应用的新型链终止剂,是四色荧光分别标记的四种ddNTPs,由于使用了四色荧光分别标记了四种ddNTPs,可按照四种不同荧光来分别识别A、T、G、C,实现了一个反应管完成循环测序反应,并通过一个电泳道完成测序任务。
   BigDye Terminators试剂盒测序的基本步骤主要是:①循环测序反应中的同一反应管内,四色荧光标记的四种ddNTPs(即BigDyeTerminators)与未标记的四种正常dNTPs在DNA聚合酶(AmpliTaq DNA polymerase, FS)的参与下,竟争性地掺入到正在延伸的DNA链末端,当BigDye Terminators掺入到正在增长的DNA链末端后,则链延伸反应终止,而当末端是正常的dNTPs时,则链延伸反应继续进行。经过30个左右的循环测序反应后,即可随机而又特异地扩增到未端碱基是BigDye Terminators的不同长度的DNA片段②循环测序反应产物经沉淀、洗涤而纯化,并去除多余的未反应的BigDye Terminators。③电泳与结果分析——电泳时,荧光标记的DNA片段在经过ABI377测序仪激光扫描窗口时被 激发而发出四种特定的不同光谱的荧光。同时,测序仪的专用激光扫描镜头实时扫描不同大小的DNA片段在相应时间通过垂直电泳胶读数区时发射的荧光,将不同大小DNA片段发射的荧光实时地传递给计算机测序数据实时收集软件,并将电泳结果转换成胶图文件及原始数据信号。电泳完毕后,DNA序列分析软件通过分析胶图文件及原始数据信号,得到最终的测序结果。

 

 

 

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